公司新闻

农杆菌感受态细胞的制备和转化实验
阅读次数:332 发布时间:2023/5/19 10:25:13
分享到:
实验概要

本实验介绍了根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备及冻融法转化。

主要试剂

利福平,LB培养基,NaCl,CaCl2,YEP培养基,卡那霉素

主要设备

摇床,高速离心机,低温冰箱,水浴锅

实验材料

根癌农杆菌GV3101单菌落

实验步骤

1. 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备

1) 挑取单菌落GV3101,接种于5mL附加有50mg/L的利福平的液体LB培养基中,28℃,200rpm,过夜;

2) 取2mL培养物至50mL液体LB培养基中,继续培养至OD600为0.5左右;

3) 将培养物冰浴30min,4℃,5000rpm,离心5min,弃上清;

4) 用l0mL 0.lmol/L冷的NaCl悬浮菌体;

5) 4℃,5000rpm,离心5min,弃上清;

6) 1 mL 20mmo1/L冷的CaCl2悬浮,分装成50uL/管,液氮速冻后,-80℃保存。

2. 冻融法转化农杆菌

1) 冰浴融化农杆菌LBA4404/GV3101感受态细胞;

2) 加入3ul表达载体质粒,冰浴30min,液氮中冻1 min,然后在37℃水浴5min;

3) 加入950uL无抗生素的YEP培养基,28℃,200rpm,振荡培养4h;

4) 1 0000rpm离心1 min以浓缩菌液,用100uL YEP回溶菌体;

5) 将回溶后的菌体涂于附加50mg/L卡那霉素和100mg/L利福平的固体YEP培养基上,28℃培养36-48h。菌液PCR检测阳性克隆。
产品搜索

请输入要搜索的关键词

联系我们
  • 公司名称:上海远慕生物科技有限公司
  • 公司地址:上海市嘉定区曹安公路5588号
  • 公司电话:021-58999639
  • 公司传真:021-58999639
  • 联系人:俞燕熙
  • 手机:13310162040
  • 网址:www.yuanmubio.com

上海远慕生物科技有限公司:细胞冻存液,氨苄青霉素溶液,人白介素ELISA试剂盒,大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒,显色试剂盒,新生牛血清,标准胎牛血清,牛血清白蛋白溶液,小鼠血浆,鸡红细胞,透明质酸酶溶液,微生物培养基,胰蛋白酶储存液,两性霉素B溶液,LB冷冻缓冲液,ABTS试剂,磷酸酶抑制剂,EB缓冲液,荧光染色试剂盒,肥大细胞染色液,人源基因质粒,胡蔓藤碱乙标准品,番茄红素标准品,Pd-C-II标准品,知母皂苷E标准品,穿刺培养基,puc19质粒,CPD抗凝剂,荧光抗体稀释液
地址:上海市嘉定区曹安公路5588号 电话:021-58999639 传真:021-58999639 技术支持:阿仪网 总访问量:6628719

在线客服
热线电话

02158999639

13310162040

工作时间:8:30-18:00

12

阿仪网推荐收藏该企业网站