公司新闻

远慕实验:PC12细胞培养实验步骤
阅读次数:509 发布时间:2020/7/31 9:58:14
分享到:

PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株,具神经内分泌细胞的一般特征,因其具可传代特点,广泛应用于神经生理和神经药理学研究。

1. PC12细胞有两种:未分化型和分化型。其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强,传代时需要胰酶消化,形状不规则。分化型PC12细胞传代时不需要胰酶,直接可以吹下来,形状规则。这两种细胞没有很大的区别,但我在实验中发现,未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要差一些。

2. 由于PC12细胞是一种肿瘤细胞,在传代次数较多后,它的形状和性状会发生改变。这些改变尤见于未分化型PC12细胞。主要是细胞形状变得更加不规则,对药物的敏感性愈加下降。因此,建议长期用PC12细胞作实验的战友zui好严格控制细胞的传代次数。

3.在复苏细胞时动作一定要迅速,放入温水中1~2min后要马上加入培养液中,培养12~24小时后更换一次培养液,这样不仅可以把DMSO吸掉,而且可以将死亡的细胞也吸掉。细胞一天一看即可,经常动会有影响。注意过滤后血清的PH值,因为培养液过滤后PH值会有所改变。复苏后的换液时间取决于您复苏时是否洗涤离心细胞,去除了冻存液中的DMSO,如果没有去除DMSO,细胞培养过夜后就要彻底换液;如果复苏时洗涤离心过,可以待传代时再换液也可。(据我个人经验,还是复苏时去除DMSO,细胞的生长状态好一些)

 

4. 状态良好的细胞复苏后 4 h即可贴壁,开始增殖,大约2 d即可传代,接种48h应该到了对数增长期。

5. 每天观察一两次细胞我不认为会对细胞的生长造成不良影响,不过每次观察的时间不易过长。

6. 传代时我认为zui好不要用胰蛋白酶,因为胰蛋白酶对细胞有破坏作用。我以前用胰蛋白酶消化传代过PC12, 结果传代后的细胞虽然贴壁,形态也好,但就是增殖缓慢,所以我现在都是用枪吸取培养液直接吹打,传代后细胞增殖迅速,2 d就长满了(因为长的太快,我只好降低血清浓度,用5%FBS)

7. 传代的时机zui好选在细胞生长旺盛,占瓶底70%-80%时zui好,如果细胞长的太满,细胞的状态会越来越差,zui后大片死亡;这种细胞传代后生长也不好;而且长的太满后,细胞贴壁牢,难于吹起来,相反,70%-80%时细胞很容易吹起来。

8. 如果细胞贴壁太紧,不得不用胰蛋白酶消化,注意低浓度,段时间,多洗涤。我一般用0.025%的胰蛋白酶,在镜下观察细胞突起收缩,有零星的细胞漂起就中止,或用肉眼观察,瓶底呈现薄雾状的模糊感时就中止,中止一定要彻底,要用含血清的培养液多洗涤离心几次,确保去除剩余的胰蛋白酶,否则传代后的细胞难以生长。

9. 就培养器皿的选用,我推荐在60mm的培养皿中培养传代,,在皿里细胞生长的更快,我想可能是皿比瓶的气体交换更好吧;第二,传代时吹打更方便,不易污染。

产品搜索

请输入要搜索的关键词

联系我们
  • 公司名称:上海远慕生物科技有限公司
  • 公司地址:上海市嘉定区曹安公路5588号
  • 公司电话:021-58999639
  • 公司传真:021-58999639
  • 联系人:俞燕熙
  • 手机:13310162040
  • 网址:www.yuanmubio.com

上海远慕生物科技有限公司:细胞冻存液,氨苄青霉素溶液,人白介素ELISA试剂盒,大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒,显色试剂盒,新生牛血清,标准胎牛血清,牛血清白蛋白溶液,小鼠血浆,鸡红细胞,透明质酸酶溶液,微生物培养基,胰蛋白酶储存液,两性霉素B溶液,LB冷冻缓冲液,ABTS试剂,磷酸酶抑制剂,EB缓冲液,荧光染色试剂盒,肥大细胞染色液,人源基因质粒,胡蔓藤碱乙标准品,番茄红素标准品,Pd-C-II标准品,知母皂苷E标准品,穿刺培养基,puc19质粒,CPD抗凝剂,荧光抗体稀释液
地址:上海市嘉定区曹安公路5588号 电话:021-58999639 传真:021-58999639 技术支持:阿仪网 总访问量:6627389

在线客服
热线电话

02158999639

13310162040

工作时间:8:30-18:00

12

阿仪网推荐收藏该企业网站